人血清蛋白與干擾素α-2b融合蛋白的定量和定性測定

背景介紹


利用人血清白蛋白融合技術,制備一種在體內半衰期長,生物學活性高的長效研究重組人血清白蛋白.干擾素α2b融合蛋白,可用于病毒性肝炎,腫瘤等相關疾病的治療.重組人血清白蛋白‐干擾素α2b融合蛋白是一種新型、長效、具有抗病毒、抗腫瘤及免疫調節作用的細胞因子其半衰期較天然的干擾素α2b長且干擾素抗體的產生時間相對較晚在臨床上對患者本次實驗使用的樣品為康寶集團客戶提供的三個批次的重組人血清蛋白與干擾素α-2b融合蛋白樣品(編號:rIFNα-2b-HAS 20161101、 rIFNα-2b-HSA 20161102、 rIFNα-2b-HSA 20161203),主要進行蛋白的分離和定性定量實驗。

1.實驗條件儀器:LUMEX  Capel 205毛細管電泳儀

毛細管條件:長度42 cm,內徑75 um

分析波長:280 nm

分析電壓:15 kV

分析溫度:20℃

進樣條件:30 mbar進樣10秒

分析時間:9 min

緩沖液:15 mmol磷酸鹽緩沖液

2.實驗過程

取HAS 20161101批樣品,分別通過原液稀釋2倍,4倍,8倍,16倍,共5個濃度濃度,濃度分別為236.25、472.5、945、1890和3780 mg/L。按照設置的條件進行分析,每個樣品重復進樣3次。

空白:取水作為空白對照溶液。進樣2次。按照此分析程序及條件,樣品的圖譜如下:下:

從以上的結果圖譜中可以看出,在所應用的條件下基本能夠分析出樣品,樣品的遷移時間在7-8 min左右,三次進樣的平行性非常好。

通過不同濃度樣品的濃度以及峰面積通過外標法進行標準曲線的繪制,儀器軟件結果如下:

圖中可以看出,樣品的曲線情況,線性系數R= 0.9995、0.9999和0.9995, 滿足分析的要求,相對偏差比較小。

此次換了毛細管和緩沖液進行分析,比之前時間晚一些。如果更換換柱子可能時間會有所不同,但是對分析影響不大。本條件是本次實驗所應用,條件后期還應該可以進行優化和設置,可以采用不同的毛細管及SDS條件進行條件的優化。

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